藁本内酯的稳定性研究及异构化产物的GC-MS分析
作者：李桂生 马成俊 李香玉 刘珂
单位：山东绿叶制药股份有限公司研究开发中心 烟台 264003
关键词：藁本内酯的稳定性；藁本内酯的异构化；GC-MS分析
中草药000603摘 要 藁本内酯 (ligustilide)分别于室温、4 ℃、-20 ℃放置 ，以气相色谱法进行稳定性考察，结果表明藁本内酯可在-20 ℃稳定保存。通过对异构化产 物的GC-MS分析，推测了其异构化产物的结构及可能的异构化途径。
Studies on the Stability of Ligustilide and the Analysis of Its Isomerized Products by GC-MS
Li Guisheng, Ma Chengjun, Li Xiangyu and Liu Ke
, http://www.100md.com
(Center of Research and Development, Shandong Lüye Pharmaceut ical Co. Ltd. Yantai 264003)
Abstract Ligustilide was kept separately at room temperatur es of 4 ℃ and -20 ℃ and examined periodically by GC. The results showed that l i gustilide could be kept only below -20 ℃. It is labile to isomerize at room te m perature. By GC-MS analysis, it is possible to trace the structural changes of its isomerization pathway.
Key words stability of ligustilide isomerization of ligust ilide GC-MS
, http://www.100md.com
藁本内酯是我国传统中药伞形科植物当归 Angelica sinensis (Oliv.) Di els 及川芎 Ligusticum chuanxiong Hort. 挥发油的主要活性成分，约占当归挥发油 的35%[1]，占川芎挥发油的58%[2]，具有较强的抗胆碱作用[3] ，是评价当归、川芎等常用中药材及制剂的重要依据之一。但其纯品在室温下极不稳定。我 们发现：纯品藁本内酯在室温条件下15 d即有约58%的异构化。为寻找藁本内酯稳定的储存 条件，对其不同温度下的稳定性进行了考察，用GC-MS方法分析了其异构化产物，并推测了 其可能的异构化途径。
1 材料与方法
1.1 材料：(Z)-藁本内酯由本中心从当归挥发油中分离制备，经气相色谱面 积归一化法测定其纯度为99.48%；日本岛津GC-14B气相色谱仪，美国惠普公司HP6890 GC -MS系统。
, http://www.100md.com
1.2 方法
1.2.1 留样方法：藁本内酯 10 mg 于 7 mL 西林瓶中密封，分别于室温、4 ℃、-20 ℃处保存，不同时间间隔检测。
1.2.2 气相色谱检测条件：聚甲基苯基乙烯基硅氧烷(SE-54)毛细管柱，长50 m ，内径 0.2 mm，柱温 100 ℃～240 ℃，10 ℃/min 程序升温，柱前压 210 kPa，气化室温度 28 0 ℃，检测器温度 280 ℃，分流比 30∶1，尾吹 40 mL/min，检测器 FID。
1.2.3 GC-MS检测条件：5%苯基聚硅氧烷(HP-5)毛细管柱，长 25 m，内径 0.2 mm， 柱温 80 ℃～240 ℃，3 ℃/min程序升温，氦气 0.96 mL/min，分流比 30∶1，进样器温 度 280 ℃；离子源EI， 电离能量 70 eV，离子源温度 200 ℃，接口温度 260 ℃， 倍增电压 1.4 kV，扫描质量范围 40～50 amu。
, 百拇医药
2 结果和讨论
2.1 稳定性研究结果表明，藁本内酯在室温条件下极不稳定，保存 15 d 纯度由99.48% 降至41.97%。GC分析表明其降解产物十分复杂(见图1)。降低保存温度，藁本内酯在 -20 ℃时基本稳定。藁本内酯在不同温度条件下的稳定性见表1。
a-0时间GC色谱图 b-15 d后GC色谱图
图1 藁本内酯室温留样的GC分析
表1 藁本内酯稳定性考查结果(含量%) 放置条件
检测时间 (d)
0
, http://www.100md.com 15
30
60
90
室温暗处
99.48
41.97
-
-
-
4 ℃冰箱冷藏
99.48
86.67
, http://www.100md.com
-
-
-
-15 ℃冰箱冷藏
99.48
99.39
99.20
99.24
99.15
“-”表示因藁本内酯的纯度已发生明显降低而未进行检测
2.2 对异构化产物进行GC-MS分析表明，藁本内酯于室温条件下保存可生成多 种异构化产物，其主要产物有8种，占异构化产物的90.81%(见表2)。经质谱解析，鉴定了 其中5种化合物，推测其可能的异构化途径如图2。
, http://www.100md.com
表2 藁本内酯异构化产物成分的GC-MS分析结果 化物名称
保留时间
(min)
质谱碎片离子特征峰值
含量
(%)
邻苯二甲酸酐
12.97
148(M+，19)，104(100)，7 6(61)，50(22)
3.61
环己二烯-1，2-二甲酸酐
, 百拇医药
14.38
150(M+，78)，1 06(82)，78(100)，51(27)
7.22
正丁烯基苯酞
25.38
188(M+，20)，159(100)，1 46(34)，131(24)，103(23)，77(20)，44(24)
7. 39
3，d-环氧正丁烯基苯肽
26.2
204(M+，1)，162(54) ，132(27)，104(100)，76(28)
, http://www.100md.com
1.00
3，d-环氧藁本内酯
26.81
206(M+，5)，164(74)， 134(64)，106(100)，78(50)
2.38
(Z)-藁本内酯
27.14
190(M+， 66)， 161(100)，148(75)，134(16)，135(15)，120(12) ，105(90)，91(14)，78(25)，77(26)
41.00
, 百拇医药
C12H14O4
29.10
222(M+，8 4)，193(19)，178(34)，166(36)，151(51)，149(3 3)，137(40)，123(36)，109(34)，95(33)，81(37) ，55(100)
4.01
C12H16O3
30.91
206(M+，8 0)，177(31)，164(62)，149(15)，135(100)，122( 34)，107(36)，91(14)，77(18)，55(30)
, 百拇医药
1.47
C12H16O4
33.19
224(M+，34 )，180(100)，165(18)，151(42)，138(12)，123(1 0)，95(14)
26.50
图2 藁本内酯的异构化途径
上述研究表明，作为评价当归、川芎等重要常用中药质量的藁本内酯在纯品状态下室 温极不稳定，它可发生脱氢、氧化、水解、降解等异构化反应。但在-20 ℃保存可防止上 述反应发生。这为纯品藁本内酯的制备及保存提供了研究基础。另外，我们发现在室温条件 下藁本内酯在挥发油中基本稳定，不会出现纯品状态下的异构化反应，这可能是挥发油本身 含有一定比例的藁本内酯异构化产物，使异构化反应趋于平衡所致。
, 百拇医药
李桂生 男，1997年毕业于青岛海洋大学海洋生命学院，获理学硕士学位。现任职山东绿叶 制药股份有限公司研究开发中心，主要从事于海洋活性物质的研究及其新药的研制与开发工 作。目前为山东省科学技术攻关项目《贻贝抗风湿因子提取的研究》及《羊栖菜功效成分——褐藻多糖硫酸酯的研究》的课题负责人。
参 考 文 献
1，陈耀祖，等.高等学校化学学报，1984，5(1)：125
2，黄远征，等.药学学报，1988，23(6)：426
3，中国医学科学院药物研究所编.中草药现代研究(第二卷).北京：北京医科大学 中国协合医科大学联合出版，1996：11
(2000-01-24收稿), 百拇医药
单位：山东绿叶制药股份有限公司研究开发中心 烟台 264003
关键词：藁本内酯的稳定性；藁本内酯的异构化；GC-MS分析
中草药000603摘 要 藁本内酯 (ligustilide)分别于室温、4 ℃、-20 ℃放置 ，以气相色谱法进行稳定性考察，结果表明藁本内酯可在-20 ℃稳定保存。通过对异构化产 物的GC-MS分析，推测了其异构化产物的结构及可能的异构化途径。
Studies on the Stability of Ligustilide and the Analysis of Its Isomerized Products by GC-MS
Li Guisheng, Ma Chengjun, Li Xiangyu and Liu Ke
, http://www.100md.com
(Center of Research and Development, Shandong Lüye Pharmaceut ical Co. Ltd. Yantai 264003)
Abstract Ligustilide was kept separately at room temperatur es of 4 ℃ and -20 ℃ and examined periodically by GC. The results showed that l i gustilide could be kept only below -20 ℃. It is labile to isomerize at room te m perature. By GC-MS analysis, it is possible to trace the structural changes of its isomerization pathway.
Key words stability of ligustilide isomerization of ligust ilide GC-MS
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藁本内酯是我国传统中药伞形科植物当归 Angelica sinensis (Oliv.) Di els 及川芎 Ligusticum chuanxiong Hort. 挥发油的主要活性成分，约占当归挥发油 的35%[1]，占川芎挥发油的58%[2]，具有较强的抗胆碱作用[3] ，是评价当归、川芎等常用中药材及制剂的重要依据之一。但其纯品在室温下极不稳定。我 们发现：纯品藁本内酯在室温条件下15 d即有约58%的异构化。为寻找藁本内酯稳定的储存 条件，对其不同温度下的稳定性进行了考察，用GC-MS方法分析了其异构化产物，并推测了 其可能的异构化途径。
1 材料与方法
1.1 材料：(Z)-藁本内酯由本中心从当归挥发油中分离制备，经气相色谱面 积归一化法测定其纯度为99.48%；日本岛津GC-14B气相色谱仪，美国惠普公司HP6890 GC -MS系统。
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1.2 方法
1.2.1 留样方法：藁本内酯 10 mg 于 7 mL 西林瓶中密封，分别于室温、4 ℃、-20 ℃处保存，不同时间间隔检测。
1.2.2 气相色谱检测条件：聚甲基苯基乙烯基硅氧烷(SE-54)毛细管柱，长50 m ，内径 0.2 mm，柱温 100 ℃～240 ℃，10 ℃/min 程序升温，柱前压 210 kPa，气化室温度 28 0 ℃，检测器温度 280 ℃，分流比 30∶1，尾吹 40 mL/min，检测器 FID。
1.2.3 GC-MS检测条件：5%苯基聚硅氧烷(HP-5)毛细管柱，长 25 m，内径 0.2 mm， 柱温 80 ℃～240 ℃，3 ℃/min程序升温，氦气 0.96 mL/min，分流比 30∶1，进样器温 度 280 ℃；离子源EI， 电离能量 70 eV，离子源温度 200 ℃，接口温度 260 ℃， 倍增电压 1.4 kV，扫描质量范围 40～50 amu。
, 百拇医药
2 结果和讨论
2.1 稳定性研究结果表明，藁本内酯在室温条件下极不稳定，保存 15 d 纯度由99.48% 降至41.97%。GC分析表明其降解产物十分复杂(见图1)。降低保存温度，藁本内酯在 -20 ℃时基本稳定。藁本内酯在不同温度条件下的稳定性见表1。
a-0时间GC色谱图 b-15 d后GC色谱图
图1 藁本内酯室温留样的GC分析
表1 藁本内酯稳定性考查结果(含量%) 放置条件
检测时间 (d)
0
, http://www.100md.com 15
30
60
90
室温暗处
99.48
41.97
-
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-
4 ℃冰箱冷藏
99.48
86.67
, http://www.100md.com
-
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-
-15 ℃冰箱冷藏
99.48
99.39
99.20
99.24
99.15
“-”表示因藁本内酯的纯度已发生明显降低而未进行检测
2.2 对异构化产物进行GC-MS分析表明，藁本内酯于室温条件下保存可生成多 种异构化产物，其主要产物有8种，占异构化产物的90.81%(见表2)。经质谱解析，鉴定了 其中5种化合物，推测其可能的异构化途径如图2。
, http://www.100md.com
表2 藁本内酯异构化产物成分的GC-MS分析结果 化物名称
保留时间
(min)
质谱碎片离子特征峰值
含量
(%)
邻苯二甲酸酐
12.97
148(M+，19)，104(100)，7 6(61)，50(22)
3.61
环己二烯-1，2-二甲酸酐
, 百拇医药
14.38
150(M+，78)，1 06(82)，78(100)，51(27)
7.22
正丁烯基苯酞
25.38
188(M+，20)，159(100)，1 46(34)，131(24)，103(23)，77(20)，44(24)
7. 39
3，d-环氧正丁烯基苯肽
26.2
204(M+，1)，162(54) ，132(27)，104(100)，76(28)
, http://www.100md.com
1.00
3，d-环氧藁本内酯
26.81
206(M+，5)，164(74)， 134(64)，106(100)，78(50)
2.38
(Z)-藁本内酯
27.14
190(M+， 66)， 161(100)，148(75)，134(16)，135(15)，120(12) ，105(90)，91(14)，78(25)，77(26)
41.00
, 百拇医药
C12H14O4
29.10
222(M+，8 4)，193(19)，178(34)，166(36)，151(51)，149(3 3)，137(40)，123(36)，109(34)，95(33)，81(37) ，55(100)
4.01
C12H16O3
30.91
206(M+，8 0)，177(31)，164(62)，149(15)，135(100)，122( 34)，107(36)，91(14)，77(18)，55(30)
, 百拇医药
1.47
C12H16O4
33.19
224(M+，34 )，180(100)，165(18)，151(42)，138(12)，123(1 0)，95(14)
26.50
图2 藁本内酯的异构化途径
上述研究表明，作为评价当归、川芎等重要常用中药质量的藁本内酯在纯品状态下室 温极不稳定，它可发生脱氢、氧化、水解、降解等异构化反应。但在-20 ℃保存可防止上 述反应发生。这为纯品藁本内酯的制备及保存提供了研究基础。另外，我们发现在室温条件 下藁本内酯在挥发油中基本稳定，不会出现纯品状态下的异构化反应，这可能是挥发油本身 含有一定比例的藁本内酯异构化产物，使异构化反应趋于平衡所致。
, 百拇医药
李桂生 男，1997年毕业于青岛海洋大学海洋生命学院，获理学硕士学位。现任职山东绿叶 制药股份有限公司研究开发中心，主要从事于海洋活性物质的研究及其新药的研制与开发工 作。目前为山东省科学技术攻关项目《贻贝抗风湿因子提取的研究》及《羊栖菜功效成分——褐藻多糖硫酸酯的研究》的课题负责人。
参 考 文 献
1，陈耀祖，等.高等学校化学学报，1984，5(1)：125
2，黄远征，等.药学学报，1988，23(6)：426
3，中国医学科学院药物研究所编.中草药现代研究(第二卷).北京：北京医科大学 中国协合医科大学联合出版，1996：11
(2000-01-24收稿), 百拇医药
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